分枝桿菌的細胞壁內含有大量脂質包圍在肽聚糖的外面, 所以分枝桿菌一般不易著色，分枝桿菌中的分 枝菌酸與染料一旦結合后，就很難被酸性脫色液脫色，故名抗酸染色。傳統的染色方法要經過加熱和延長染色時間來促使其著色，其中具代表性的是結核桿菌Ziehl－Neelsen染色法，該法是WHO和中國結核病防治規劃中推薦的熱染方法。

     抗酸染色液(Ziehl－Neelsen熱染法)屬于熱染色液，其染色原理是在加熱條件下，分枝菌酸與復紅結合成復合物，經亞甲藍復染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細菌及背景中的物質為藍色，該試劑更適用于冷染法效果不佳的情況。該試劑僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

抗酸菌(結核桿菌等)染色,可鑒別抗酸菌與非抗酸菌；經典抗酸菌染色法,中國結核桿菌防治規劃痰涂片檢驗標準化操作,結果為：抗酸桿菌/結核桿菌呈紅色,非抗酸桿菌和背景呈藍色。主要由石炭酸復紅液、脫色液、亞甲藍復染液組成。室溫,避光,24個月