影響ELISA實驗的部分因素

     目前，病毒性疾病的診斷主要依賴對其抗原或是抗體的檢測，國內使用zui多的就是酶聯免疫吸附法實驗，酶免實驗靈敏度較高。但是如何保證結果的，結合實驗人員實際操作，對影響酶免檢測結果的因素粗略的分析一下。

一 試劑盒的選擇

   時機和質量直接影響到結果的準確性。目前國內試劑盒與國外的質量相差不大，94年起國家對體外診斷試劑統一實行批批檢測。我們的經驗是根據同行對試劑盒的使用滿意度，部分根據衛生部檢測中心對參加室間質評實驗室的試劑盒使用情況綜合評價。

通常試劑盒的效期是根據酶結合物的穩定性確定。這是試劑的核心組份，要防止反復的劇烈溫差變化，取用時的原則“即取即用”減少酶的失活，或者直接采購小包裝的試劑盒。

二標本

標本質量的好壞直接影響到結果的準確性，目前實驗室zui常用的標本為血清。首先家養一定要在血塊*收縮分離后進行，否則纖維蛋白容易吸附孔底導致假陽性結果。溶血對酶免實驗結果也會有較大影響。在標本采集時用玻璃試管采集，有報道塑料試管存放，進行乙肝兩對半檢測。結果4H后明顯偏低，這是因為聚乙烯有吸附抗原或抗體蛋白，但是目前大多數的實驗室免疫項目并非每天都做，比如乙肝兩對半抗HCV等。

三 加樣稀釋

   我國大多數抗HCV等試驗標本只有10μl  10%的誤差。以2μl/L HBsAg質控血清進行試驗，加量分別為50μl 45μl，其余條件一致，測定結果吸光度分別為0.405±0.026和0.288±0.047.因此，移液器的準確性需要進行校驗。使用進口移液器，同時移液器，移液器要與吸頭連接緊密。

   關于稀釋劑，媒介和物的家主，國內也有部分使用滴瓶滴加，但是加液兩不夠準確會造成稀釋倍數的差距。建議使用移液器加注。

四 育溫

通常在37度的水浴箱中完成，水浴箱的溫度指示為水的溫度，不過要值得注意的是不能將反應板放在試管架上，要是反應板飄浮在水面上稍高出試管架，箱蓋不能時常打開，保持箱內的溫度恒定，相反的情況容易假陽性結果。

五洗版

   選擇手動洗版，手工法洗版每洗一次在吸水紙上拍干一般都能保證洗版效果。

六顯色

   國內酶聯免疫試劑盒的色源底一般分為AB兩種液體。由于兩種液體不穩定，使用保存不當容易產生顏色，發現有顏色必須丟棄，顯色時加入A液后加B液。過程按照說明書嚴格執行。否則隨著時間的延長吸光度會下降出現假陽性發生。

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   正確的結果源自實驗員對各個環節標準的把控，必須做好實驗室質控，主要就是血清的制備，每次檢測時與常規標本同時進行。

   由于試劑盒效期短，可以采取即刻法連續檢測三次，就是對三次結果進行質控，發生失控時，該批次實驗就需要從做。符合要求才能夠報告。

                                                         摘自施根林

                                                   2014年8月30日